GDF-8 1mg/Fläschchen fördert deutlich die Muskelmasse und die Kraftverbesserung

Einführung in den GDF-8 1mg/Flasche-Kern

Myostatin|Transforming Growth Factor- Mitglied der Superfamilie 1 mg/Fläschchen

Allgemeiner Name: Myostatin (Wachstumsdifferenzierungsfaktor-8)

Englischer Name: Myostatin (Wachstumsdifferenzierungsfaktor 8, GDF-8)

Proteinstruktur: Reife Peptide sind Homodimere, wobei jede Kette etwa 110 Aminosäuren enthält.

Molekulargewicht: Ungefähr 25 kDa (Monomerform)

Reinheit: Größer als oder gleich 90 % (SDS-PAGE/HPLC)

Inhalt: 1 mg/Flasche

Aussehen: Weißes lyophilisiertes Pulver

Lagerung: Bei -80 Grad einfrieren, vor Licht schützen und an einem trockenen Ort aufbewahren.

Nutzungs- und Aufbewahrungsanleitung

GDF-8 (Myostatin):

GDF-8, ein Mitglied der Superfamilie der transformierenden Wachstumsfaktoren-, wird hauptsächlich in der Skelettmuskulatur exprimiert. Als negativer Regulator des Muskelwachstums kontrolliert es präzise die Skelettmuskelmasse, indem es an den Signalweg des Aktivinrezeptors IIB/ALK4/5 bindet und so die Proliferation und Differenzierung von Myoblasten hemmt. Als wichtiges negatives Feedback-Signalprotein für das Muskelwachstum spielt es eine zentrale Rolle in experimentellen Modellen der Muskelentwicklung, Regeneration, Atrophie (wie Krebskachexie und altersbedingte Sarkopenie) und Stoffwechselerkrankungen. Im Vergleich zu Pro-Anabolismus-Faktoren bieten seine negativen regulatorischen Eigenschaften eine einzigartige Perspektive für das Verständnis der Gleichgewichtsmechanismen der Muskelhomöostase.

Aufgrund seiner entscheidenden negativen regulatorischen Rolle beim Muskelwachstum wird GDF-8 häufig von Forschern in der Muskelbiologie, der regenerativen Medizin, der Trainingsphysiologie und bei Stoffwechselerkrankungen eingesetzt. Im Vergleich zu Gen-Knockout-Modellen bietet seine rekombinante Proteinform ein standardisiertes experimentelles Werkzeug zur präzisen Steuerung der Intensität von Hemmsignalen und zur Untersuchung von Dosis-Wirkungs- und Zeitprozessen in vitro und in vivo. Seine Anwendung in Studien zu Muskelregenerationsstörungen, Modellen der Muskelatrophie und Stoffwechselforschung im Zusammenhang mit Muskel-Fett-Wechselwirkungen bietet eine Grundlage für die Bewertung möglicher Interventionsstrategien, die auf den GDF-8-Signalweg abzielen.

GDF-8-Anwendungen:

Als klassischer negativer Regulator des Muskelwachstums wird es in In-vitro- und In-vivo-Modellen verwendet, um hemmende Signale für das Muskelwachstum genau zu simulieren oder zu verstärken und so seine hemmenden Wirkungen auf die Proliferation, Differenzierung, Skelettmuskelmasse und -funktion von Myoblasten zu untersuchen. Es dient vor allem der Erforschung der molekularen Mechanismen von Muskelatrophie, beeinträchtigter Muskelregeneration und den Wechselwirkungen zwischen Muskeln und anderen Geweben (wie Fett und Knochen).

Es wird häufig in Modellen der Muskelatrophie, Studien zur Funktion von Myoblasten/Satellitenzellen, Experimenten zur Muskelregeneration und Forschung zu Muskelstoffwechselstörungen im Zusammenhang mit Fettleibigkeit und Diabetes eingesetzt. Seine standardisierte rekombinante Proteinform stellt ein zentrales Forschungsinstrument für die Bewertung neuartiger Medikamente gegen Muskelatrophie, die Untersuchung der molekularen Grundlagen der Trainingsanpassung und die Erforschung therapeutischer Strategien dar, die auf die GDF-8-Signalisierung abzielen.

Verwendungs- und Speichermethoden

1. Rekonstitution und Vorbereitung:

Empfohlenes Lösungsmittel:

Bevorzugtes Lösungsmittel: Verdünnte Essigsäurelösung mit pH 4,0–5,0 (z. B. 20 mM Essigsäure).

Schlüsselträger: Das Trägerprotein muss hinzugefügt werdenzum Lösungsmittel und allen Verdünnungsmitteln;Empfohlen wird eine sterile Essigsäurelösung mit 0,1 % Rinderserumalbumin (BSA).

Verdünnung der Arbeitslösung: Auf physiologischen pH-Wert verdünnen mitsteriles PBS oder Zellkulturmedium mit 0,1–1 % BSA.

Absolut verboten: Es ist strengstens verboten, das Protein direkt mit reinem Wasser, neutralem PBS oder Lösungen ohne Trägerproteine ​​aufzulösen oder zu verdünnen.Andernfalls kommt es zu irreversibler Proteinaggregation, Ausfällung und Inaktivierung.

Standard-Vorbereitungsverfahren:

Lösungsmittelvorbereitung:

Bereiten Sie eine 20 mM sterile Essigsäurelösung mit 0,1 % BSA (oder Trägerprotein höherer Reinheit) vor und filtern Sie sie durch eine 0,22 μm-Filtermembran.

Das Lösungsmittel muss vor der Verwendung auf Eis vor-gekühlt werden.

Rekonstitutionsverfahren:

Führen Sie den Vorgang auf Eis durch. Geben Sie 1,0 ml vor-gekühltes saures Trägerproteinlösungsmittel in ein 1-mg-Fläschchen.

Verwenden Sie eine Mikropipette, um die Probe sehr langsam entlang der Flaschenwand zu injizieren und dabei die Entstehung von Luftblasen oder einen direkten Aufprall auf den gefriergetrockneten Kuchen zu vermeiden.

Stellen Sie das Fläschchen auf Eis undDrehen Sie es vorsichtig 5-10 Minuten lang horizontalbis sich das Pulver vollständig aufgelöst hat.Nicht vorwirbeln, schütteln, aufblasen oder heftig schütteln.

Endkonzentration: 1 mg/ml (ca. 40 μM) saure Stammlösung.

Dosierung und Gradientenverdünnung:

Sofort in Einzeldosen von 2-10 μL unter Verwendung silanisierter Zentrifugenröhrchen mit geringer Adsorption auf Eis verteilen.

Beim Verdünnen verdünnen Sie zunächst die saure Stammlösung mindestens 100-fach mit PBS oder Kulturmedium mit 0,1–1 % BSA, um den pH-Wert zu neutralisieren. Nehmen Sie beispielsweise 1 μL der Stammlösung und geben Sie sie zu 99 μL PBS mit 1 % BSA, um eine Zwischenlösung von 10 μg/ml zu erhalten.

Die Zwischenlösung wird dann auf die endgültige Arbeitskonzentration verdünnt. Alle Verdünnungsschritte werden auf Eis durchgeführt.

Deutlich gekennzeichnet: GDF-8, Konzentration, pH-Wert, Herstellungsdatum, Chargennummer, Lagertemperatur.

Referenz zur Arbeitskonzentration:

In-vitro-Zellexperimente: Der üblicherweise verwendete Konzentrationsbereich liegt bei 0,1 bis 5 ug/ml (ca. 4 bis 200 nM), der je nach Zelltyp und Versuchszweck optimiert werden muss.

In-vivo-Tierversuche: Die Dosierung muss streng nach dem Modell und dem Verabreichungsweg (z. B. intraperitoneal, intramuskulär, intravenös) auf der Grundlage der Literatur bestimmt werden. Der üblicherweise verwendete Bereich liegt im Bereich von ug/kg bis mg/kgEs müssen Vorversuche durchgeführt werden.

Berechnungsbeispiel: Um eine 100 ng/ml-Arbeitslösung herzustellen, nehmen Sie 1 μL der 10 ug/ml-Zwischenlösung und geben Sie diese zu 100 μL Kulturmedium.

Wichtige Punkte, die Sie beachten sollten:

Niedrige Temperatur und Sanftheit: Der gesamte Vorgang muss auf Eis durchgeführt werden und die Bewegungen müssen äußerst sanft seinum eine Proteindenaturierung zu verhindern.

Forcierte Säureauflösung: Es muss in einer sauren Pufferlösung (pH 4-5) gelöst werden., was für die Aufrechterhaltung seiner Löslichkeit und Aktivität von entscheidender Bedeutung ist.

Zwangsträgerproteine: Die Auflösung und Verdünnung muss mit Lösungen erfolgen, die Trägerproteine ​​wie BSA enthaltenum Adsorption und Aggregation zu verhindern.

Einfrieren-Tauzyklus ist strengstens verboten: Wiederholte Einfrier-{0}}Auftauzyklen sind strengstens untersagt; Die Lösung muss auf einmal abgegeben werden. Verdünnte Arbeitslösungdürfen nicht gespeichert werden; es muss sofort zubereitet und verwendet werden.

Beobachtung des Zustandes: Nach der Rekonstitution sollte die Lösung klar und leicht opaleszierend sein. Das Vorhandensein von Flockungsmitteln, Partikeln oder Trübungen weist darauf hin, dass das Protein denaturiert und aggregiert ist und die Lösung verworfen werden muss.

2. Lagerbedingungen:

Nicht rekonstituiertes lyophilisiertes Pulver:

Nur Lagerung: -80 Grad (tiefgefroren).). Nicht bei -20 Grad lagern.

Haltbarkeit: 12 Monate bei -80 Grad.

Streng vor Licht schützen: Im originalen, lichtbeständigen Aluminiumfolienbeutel mit einem Trockenmittel darin aufbewahren.

Rekonstituierte Lösung:

Sofortige Abgabe:Abgabemuss innerhalb von 5 Minuten abgeschlossen seinnach der Rekonstitution.

Neu verpackt und eingefroren: Kann nur bei -80 Grad gelagert werden, maximale Haltbarkeit 2 Wochen, nicht zur Lagerung empfohlen.

Die Lagerung ist strengstens untersagt: Die verdünnte Arbeitslösung mussnicht gespeichert werdenund muss auf Eis gehalten und innerhalb von 4 Stunden verbraucht werden.

Transportbedingungen:

Es muss transportiert werdenunterTrockeneis(-78 Grad) Bedingungen.

Die Verpackung muss über ausreichend Trockeneis und Isolierung verfügen, um sicherzustellen, dass sie während des gesamten Prozesses nicht auftaut.

3. Stabilitäts- und Verarbeitungsstandards:

Physikalisch-chemische Stabilität:

Es ist pH-empfindlich undist nur bei saurem pH-Wert (4,0-5,0) stabil und löslich. Es aggregiert leicht und fällt bei neutralem und alkalischem pH-Wert aus.

Es ist äußerst empfindlich gegenüber thermischer und mechanischer Belastung (Wirbel, Schwingungen, Blasenbildung) und wiederholten Gefrier-{0}}Tauzyklen.

Es reagiert empfindlich auf Oberflächenadsorption, daher müssen ein Trägerprotein und ein Behälter mit geringer -Adsorption verwendet werden.

Aufrechterhaltung der Bioaktivität:

vier Prinzipien: „saure Auflösung, Schutz des Trägers, Schonung bei niedrigen Temperaturen und striktes Verbot von Gefrier- und Auftauzyklen.

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